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操作过程中可能出现的问题和解决方法
来源: | 发布时间:2015-10-26 20:54:54 | 浏览次数:

操作过程中可能出现的问题和解决方法:(表格)

注:在样本处理过程中,一定按照说明书步骤进行,样本混匀充分、取液体量、离心时间和转速非常重要

 

没有去离子水或双蒸水时,可以使用娃哈哈纯净水配制溶液,切勿使用自来水

 

问题

可能原因

解决方法

显色淡,灵敏度偏低

1.试剂盒在运输途中时间太长,温度太高

尽量缩短运输时间,夏季应放冰块降温

2.试剂盒未充分平衡

试剂盒从2~8℃冰箱取出后打开盒盖,于室温平衡至少20分钟,确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)。

3.温度不足最佳反应温度

尽量满足温度要求

4.保温时间不足

校正定时钟准确定时

5.洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加

按说明书要求保留洗涤时间,准确记住洗涤次数

6.移液器吸液量不足,吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁

校正移液器,吸嘴要配套,装吸嘴时要紧密,吸嘴内壁要清洁,最好一次性使用

7.蒸馏水水质有问题

使用新鲜合格的蒸馏水

8.底物作用时间不足

准确定时

9.酶标仪滤光片设定不正确,滤光片不匹配

重新按所须设置滤光片

10.浓缩抗体稀释不正确

严格按说明说操作(现用现稀释)

背景深,全部呈有色,临界对照OD值超出规定范围

1.洗涤不充分,洗后未拍干,样品中其它成分残留或酶标记物残留

浓缩洗液准确配制;20倍浓缩洗涤液如有结晶则应让结晶于室温全部溶解后再量取稀释;充分洗涤,彻底拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用,不要反复使用,否则易造成污染

2.样品污染

样品应新鲜采集,或低温保存,防止污染

3.培养箱温度超过37℃或反应时间过长

调整培养箱温度,准确定时

4.吸嘴重复使用,未洗净或消毒不彻底

吸嘴尽可能一次性使用

5.蒸馏水被污染

使用新鲜蒸馏水

6.酶等试剂混用

不同批号试剂勿混用

7.一次实验的标本量过多,加样时间太长,导致实际反应时间延长

合理安排实验,避免几块酶标板同时加样

重复性不佳

1.样品数量多少不一,加样时间有长有短

重复某一样品时,加样时间尽可能与第一次接近

2.保温时间不一致,洗涤条件不一致,操作人员不一致

重复测定标本,操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致,以排除这些因素造成的不一致的可能性

3.加样量不一致

样品稀释前应充分混匀,尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴

出现白板,阳性对照不显色

1.未加A、B显色液

不要漏加A液和B液

2.洗涤液配制有误

请按说明书所示稀释倍数配制

3.未加酶结合物而认为已加入

注意不要漏加

4.终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用

每次加液前均应看清标签

样本回收率低

1.添加浓度量不准确或添加浓度不合适,取样本提取液吹干的量不准确,

校正移液器,根据曲线来添加最适浓度

反应板出现一片白或一片有色或临界对照OD值超出规定范围多是实验中某一环节发生问题,若逐一排除可能原因重复实验仍出现上述情况,可与另一批号试剂盒进行对照以排除试剂盒质量问题的可能性。